组织培养技术流程，组织培养技术的步骤

博宇考试网 2023-07-08 护士考试 次
组织培养技术流程，组织培养技术的步骤
本文主要针对组织培养技术流程，组织培养技术的步骤和组培课件等几个问题进行详细讲解，大家可以通过阅读这篇文章对组织培养技术流程有一个初步认识，对于今年数据还未公布且时效性较强或政策频繁变动的内容，也可以通过阅览本文做一个参考了解，希望本篇文章能对你有所帮助。

组织培养技术流程？

回答请看下方具体内容：第1个步骤，将采来的植物材料除去不需要的部分，将需的部分认真洗干净，如用一定程度上的刷子等刷洗。把材料切割成一定程度上大小，即灭菌容器能放入比较好。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。

流水冲洗在污染严重时特别有用。洗时可加入洗衣粉清洗，然后再用自来水冲净洗衣粉水。洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物，除去脂质性的物质，方便灭菌液的直接接触。 最理想的清洗物质是表面活性物质—吐温。

第2个步骤是对材料的表面浸润灭菌。需要在超净台或接种箱内完成，备好消毒的烧杯、玻璃棒、百分之70酒精、消毒液、无菌水、手表等。用百分之70酒精浸10～30秒。因为酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用，加上百分之70酒精穿透力强，也很易杀伤植物细胞，故此，浸润时间不可以过长。

有一部分特殊的材料，假设实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗，多层鳞片的休眠芽等等，还有主要取用内部的材料，则可只用百分之70酒精处理稍长时间。处理完的材料在无菌条件下，待酒精蒸发后再剥除外层，取用内部材料。

第3个步骤是用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类有点多，可按照情况选取1～2种使用见表。第4个步骤是用无菌水涮洗，涮洗要每一次3min左右，视采取的消毒液种类，涮洗3～10次左右。

1. 接种 在无菌坏境下,将切好的外植体马上接在培养基上,每瓶接种 4-10 个。

2. 封口 接种后,瓶、管用无菌药棉或盖封口,培养皿用无菌胶带封口。

3. 温度 培养基大多应保持在 25℃左右,但要因花卉

零阶段母本的选择和处理

在组培实验还未开始之前，一定要慎重选择母本材料。母本的品种/物种特性要典型，没有任何病害迹象。需考虑对母本材料进行一定处理，以降低stage 1 的外植体污染率。一定程度上的环境条件或化学试剂处理有可能提高后续组培阶段的生长、形态出现和增殖率，比如一定的高温处理、细胞分裂素和/或赤霉素的喷施。对母本可能带上的细菌和病毒进行检测是商业化植物组织培养的必要环节，但经常被忽视了。

第一阶段 无菌培养体系的建立

本阶段主要是建立起外植体的无菌培养体系。成功的标志是外植体没有微生物污染，还有一定的生长，比如茎尖的生长或愈伤组织的形成。本阶段一般会有非常多的外植体接种，经过短时间培养应该将有污染产生的培养容器丢弃掉，不可以再继续培养。本阶段只要取得目标数量的无污染，其表现生长的外植体就可以，不用百分之100的成功率。

第二阶段 繁殖体的增殖

本阶段主要目标是扩增繁殖体的数量。比如，侧芽的生长，不定芽的出现，体细胞胚的形成和微型储藏器官（块茎和鳞茎）的形成。本阶段出现的繁殖体一般再次进入增殖循环中，以扩增到需的数量。

第三阶段 移栽前培养

Stage Ⅱ出现的小苗或者芽（shoots）一般不具备在基质中自主生长的能力。在stage Ⅲ，需通过一部分培养措施让这些小苗出现足够的光合能力。有部分植物一定要在stageⅢ进行特殊处理以不要生长停滞或休眠。

生根培养是stage Ⅲ的重要工作。一般需将芽转入生根培养基中进行生根。有的情况下，在生根培养前，需将芽培养到足够的长度。为了降低成本，有不少实验室会将未生根的芽转出组培瓶外进行生根培养。

第四阶段 移栽驯化

本阶段为组培苗从组培瓶转入温室驯化培养。本阶段至关重要，假设操作不当，会导致非常多损失。主要的原因有两个：

1. 组培苗容易失水死亡。组培苗一般在高湿度和低光强条件下培养，叶片表面的蜡质没有形成。组培苗的气孔在碰见湿度降低时可能不会闭合。以上原因可能会造成组培苗在移栽后快速失水死亡。

2. 组培苗以蔗糖为碳源且处于低光强下，光合能力较弱。假设在移栽后短时间内不可以形成光合能力，也出现死亡。

一般组培苗从组培容器中取出后需洗净根上的琼脂，转入移栽基质中。在驯化早期，需高湿度和低光强的条件，这之后渐渐减低湿度和增多光强，直到适应温室环境。

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